標(biāo)題名稱：MHCC-97L MHCC-97L細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

細(xì)胞名稱：MHCC-97L 人低轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞

種屬：人

組織來(lái)源：肝

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣

培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基類型：DMEM（Hyclone SH30243.01)培養(yǎng)基

德國(guó)SERANAS-FBS-SA-015: 10%

抗生素：雙抗

培養(yǎng)條件：37℃，CO2: 5%

傳代方法   收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)：

如果沒(méi)長(zhǎng)滿，將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺(tái)內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿（約80%-90%）則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞傳代方法：

1 棄去培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

2 加1ml 0.25%的胰酶（含0.02%EDTA），讓胰酶與大部分細(xì)胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，隨時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)變化，待細(xì)胞大部分變圓后加*培養(yǎng)基終止消化。

懸浮細(xì)胞傳代方法：可以直接傳代也可以離心法傳代。

1 直接傳代是讓?xiě)腋〖?xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3，吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

2離心法傳代是將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)， 1000rpm，5分鐘，去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

 一般沒(méi)有特殊說(shuō)明，細(xì)胞一般是一傳二。

凍存方法   70% *培養(yǎng)基，20%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

儲(chǔ)存：液氮中長(zhǎng)期保存。

注  1 觀察細(xì)胞在低倍鏡下觀察，便于整體估計(jì)細(xì)胞密度。

2 在運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)導(dǎo)致一些貼壁不牢的細(xì)胞發(fā)生部分脫落，可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

3 收到細(xì)胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細(xì)胞污染等，請(qǐng)拍照并在一周內(nèi)與我們。

我公司建議用我們實(shí)驗(yàn)室所用血清品牌和貨號(hào)，細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)好，貼壁度強(qiáng)，凡購(gòu)買我公司MHCC-97L細(xì)胞，我們會(huì)贈(zèng)送20-50ML試用裝一瓶。

MHCC-97L MHCC-97L細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)-慧穎細(xì)胞庫(kù)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)：1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子，覺(jué)得這樣可以避免污染。如遇到有培養(yǎng)基越來(lái)越呈現(xiàn)紫色現(xiàn)象，是因?yàn)闊靠跓摹Ｅ囵B(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候，熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi)。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來(lái)。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會(huì)變堿。如果不燒瓶口的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。（當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼。如果有細(xì)菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國(guó)內(nèi)從來(lái)就不燒瓶口。來(lái)美國(guó)以后發(fā)現(xiàn)這里更*，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈。2. 不要頻繁看細(xì)胞。對(duì)于初學(xué)者而言，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處，特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周圍，形成有利于生長(zhǎng)的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞，細(xì)胞老是長(zhǎng)不好。老手細(xì)胞一扔好幾天不管，細(xì)胞瘋長(zhǎng)。3. 不要怕消化。在傳代的時(shí)候，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過(guò)度，早早地終止消化。細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來(lái)，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。在做血管平滑肌原代的時(shí)候，37度消化隔夜，細(xì)胞也沒(méi)事。我們一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來(lái)。還有，動(dòng)作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時(shí)的機(jī)械應(yīng)力相當(dāng)大，對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的。

KYSE30細(xì)胞*人食管鱗癌細(xì)胞

RKO細(xì)胞*人結(jié)腸腺癌細(xì)胞

HO-8910細(xì)胞*人卵巢癌細(xì)胞

HS-578T細(xì)胞*人乳腺癌細(xì)胞

BE(2)-M17細(xì)胞*人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

HT-22細(xì)胞*小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞

MLE-12細(xì)胞*小鼠肺上皮細(xì)胞

HK-2細(xì)胞*人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞

MRC-5細(xì)胞*人胚肺成纖維細(xì)胞